❶ gsk-3是ampk的下游还是上游
确定某种因子在信号传导通路的上游或下游方法：
将两种因子A和B分别做基因沉默，沉默A gene 看看A和B表达的情况，然后沉默B gene 再看看A和B表达的情况。上游的因子被沉默表达后，下游的因子肯定表达下调或不表达。而下游因子被沉默表达后，上游因子的表达不会受影响。还可以做个免疫共沉淀，看看上游因子是不是直接结合（作用）于下游因子的基因启动子区，开启下游表达。如若不是，可能另有其他的环节在中间过程。
❷ 请问测定AMP激活的蛋白激酶（AMPK）活性都有什么方法急！
早期对AMPK活性的研究是通过使HMGR和AcC活性下降来反映(Carlingetal，1987)。由于AMPK与HMGR和ACC反应的时间相对较长，而且HMGR和ACC本身的酶活易受环境影响，因此这种方法不仅费时，而且难于准确定量分析。Davies等(1989)根据ACC的Ser79片段的13个氨基酸残基序列合成了一种短肽，命名为SAMS肽，可用来直接测定AMPK活性。其氨基酸序列为:His一Me七一Arg一Ser一Ala一Met一Ser一Gly一Leu一His一Val一Lys一Arg一Arg，在C端加入两个Arg残基，可增加肤与磷酸纤维滤纸结合，而可以与未反应的ATP分离开;将一个Ser残基用Ala残基取代，可消除cAMPK依赖蛋白激酶结合位点，从而使SAMS肤成为AMPK专一性底物。测定的基本原理为:用SAMS肤和〔gama一32P」ATP作为反应底物，以转移到SAMS中的32P的量来反映AMPK的活性。SAMS的合成是研究AMPK过程中重要的一步(Hardie，1997)，提供了一种比以前更简单的分析AMPK活性的方法。研究表明，对于AMPK，SAMS肽是比ACC肤更专一的底物，其不能被蛋白激酶磷酸化，最大反应速度是ACC的2.5倍，增加了粗提取物中检测AMPK的灵敏度(Hardieetal，1989)。Davies等提出的方法己广泛用于AMPK研究。
这篇文献看过了? <猪肝细胞的分离培养和AMPK活性调控的研究>
另外一篇里面有些新方法
用化学发光方法代替同位素标记,建立一种新的体外检测AMPK活性的方法,并利用该方法比较小鼠不同组织中AMPK的活性
<AMP激活的蛋白激酶的体外测活> http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-QHXW200809030.htm